Что такое пэ в гинекологии. Женское здоровье

Распространенность бесплодного брака в России — более 15%, и эта цифра растет из года в год. Именно поэтому этой проблеме уделяется все большее внимание на уровне государства в рамках поддержки современных медицинских технологий, в том числе и программ, направленных на преодоление бесплодия, от которых ждут достаточно высоких конечных результатов: процент наступления беременности и увеличения количества «take baby home» на профинансированные циклы. В последние годы наметилась тенденция к увеличению среди супружеских пар доли пациенток позднего репродуктивного возраста, которые обращаются с целью достижения беременности и рождения ребенка (по данным Американской ассоциации репродуктивной медицины (American society reproductive medicine, ASRM) — до 12,3%). По данным Регистра Российской ассоциации репродукции человека (РАРЧ) от 2014 г., процент пациенток старше 40 лет, которым проведены программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО)/интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ИКСИ), составил 15,05%, криопереноса эмбрионов (ПЭ) — 11,3%, программ, выполненных с использованием донорских ооцитов (ДО) в возрастной группе старше 40 лет, составил 49,7% . Демографические исследования ряда стран показывают, что по различным социально-экономическим причинам все большее число женщин откладывают беременность на конец репродуктивного периода. Женщины стремятся к получению высшего образования, имеют интенсивный график работы вне дома, поздно выходят замуж и не торопятся рожать детей (Боярский К. Ю., 2009) . Кроме того, обращение ряда пациенток в более позднем репродуктивном возрасте обусловлено такими социальными аспектами, как гибель ребенка (детей), повторный брак. Основной причиной обращаемости пациенток позднего репродуктивного возраста по поводу бесплодия по данным Т. А. Назаренко и Н. Г. Мишиевой (2014) является повторный брак — 42%. 40% женщин обратились по поводу лечения бесплодия в раннем репродуктивном возрасте, однако длительное неэффективное лечение в течение 10 лет и более со сменой ряда лечебных учреждений привело к тому, что за специализированной помощью эти пациентки обратились уже в позднем репродуктивном возрасте. Отсроченное деторождение по желанию женщины составило лишь 13%, гибель единственного ребенка была мотивацией для 5% женщин. Установленные причины обращаемости представлены на рис. 1 .

Эффективность программ ЭКО во многом определяют возраст и овариальный резерв. Овариальный резерв у пациенток старшей возрастной группы, как правило, снижен. Под овариальным резервом понимают функциональный резерв яичника, который определяет способность последнего к развитию здорового фолликула с полноценной яйцеклеткой (Боярский К. Ю., 2005). Показателями низкого овариального резерва (Назаренко Т. А., Краснопольская К. В., 2012) — предиктора бедного ответа яичников на стимуляцию суперовуляции являются следующие параметры: возраст старше 35 лет; длительность менструального цикла 24-26 дней; уровень фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) более 10 МЕ; число базальных фолликулов менее 10 мм на 2-3 день цикла менее 5 в каждом яичнике; объем яичников — менее 8 см 3 . На сегодняшний день прогнозировать бедный ответ яичников принято на основании рекомендаций Европейского общества репродукции человека и эмбриологии (European Society of Human Reproduction and Embryology, ESHRE, Болонские критерии), которые включают в себя:

• предыдущий эпизод слабого ответа яичников (≤ 3 ооцитов) при стандартных дозировках гонадотропинов;
• аномальный овариальный резерв с количеством антральных фолликулов < 5-7 или антимюллеровый гормон (АМГ) < 0,5-1,1 нг/мл;
• женщины старше 40 лет или наличие других факторов риска плохого ответа, таких как операции на яичниках, генетические дефекты, химиотерапия, лучевая терапия и аутоиммунные заболевания.

Пациентки, у которых имеются по крайней мере два из следующих критериев, относят в группу с низким овариальным резервом и, как следствие, бедного ответа.

Средняя эффективность использования методов вспомогательной репродукции на один лечебный цикл составляет 30-35% (Кулаков В. И. и соавт., 2000), по данным регистра РАРЧ (2014) — 40%. Однако эти показатели не относятся к группе пациенток старше 35 лет (старший репродуктивный возраст), имеющих в основном сниженные показатели овариального резерва и низкую эффективность программ ЭКО — менее 10-20% (Назаренко Т. А., Краснопольская К. В., 2012; Никитин С. В. и соавт., 2015; Рудакова Е. Б. и соавт., 2015 и др.). В работе, проведенной в отделении вспомогательных репродуктивных технологий МОПЦ, Балашиха, по сравнению биологических показателей циклов ЭКО за 2014 г. в возрастных группах до 38 лет (1-я группа) и старше 38 лет (2-я группа), отражены следующие показатели на один лечебный цикл (табл. 1). Количество полученных яйцеклеток составило (р < 0,05): 10,6 ± 5,8 в 1-й группе и 4,7 ± 1,1 во 2-й группе соответственно; количество зрелых яйцеклеток (р < 0,05) — 7,3 ± 4,6 и 3 ± 2,6 соответственно; количество полученных эмбрионов (р < 0,05): 7,4 ± 4,4 и 3,7 ± 1,1 соответственно; количество полученных эмбрионов высшего качества (р < 0,05) — 2,4 ± 2,4 и 1,1 ± 0,3 соответственно. Клиническая беременность наступила в 39,8% в 1-й возрастной группе и 21,4% во 2-й возрастной группе .

Улучшить результаты программ ЭКО при «бедном ответе» — это задача, к решению которой приковано внимание всех специалистов, использующих для лечения бесплодия методы вспомогательных репродуктивных технологий. Исследователи предлагают разные варианты и схемы лечения как в качестве предварительной подготовки, так и в процессе стимуляции яичников . Возможными путями решения данной проблемы могут быть различные меры. Использование увеличенных доз гонадотропинов в протоколах стимуляции суперовуляции. Доза индуктора овуляции, как правило, составляет 400-450 МЕ, сочетание рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона (рФСГ) и человеческого менопаузального гонадотропина (чМГ) или, наоборот, низкодозовые протоколы стимуляции суперовуляции, так называемые «мягкие» протоколы. Совершенствование протоколов стимуляции суперовуляции (длинный протокол со снижением дозы агонистов рилизинг-гормонов (АГ-РГ); модифицированный протокол с антагонистами гонадотропин-рилизинг-гормона (антГн-РГ), сочетание в протоколе АГ-РГ и антГн-РГ), ЭКО в естественном цикле. Использование современных протоколов с криоконсервацией полученных яйцеклеток с последующим переносом размороженных эмбрионов в цикле заместительной гормональной терапии (двойная стимуляция). Методики применения стимуляторов яичникового ответа до протоколов стимуляции суперовуляции. Применение методики созревания яйцеклеток вне организма (IVM) у пациенток с неудачами ЭКО, в т. ч. при отсутствии зрелых ооцитов.

Сочетание рФСГ и чМГ основывается на наличии в менотропинах лютеинизирующего гормона (ЛГ), что профилактирует повышение эндогенного уровня ЛГ. Аргументом сторонников менотропинов явилась необходимость использования положительных эффектов ЛГ в позднюю фолликулярную фазу при «бедном ответе» .

Низкодозовые («мягкие») протоколы стимуляции основаны на назначении небольших доз (100-200 МЕ), если на 7-8 день естественного менструального цикла визуализируется 2-3 фолликула. При достижении фолликулами диаметра 14 мм назначают дополнительно антГн-РГ до дня введения триггера овуляции включительно. «Мягкие» протоколы стимуляции обеспечивают снижение курсовой дозы гонадотропинов, что способствует уменьшению стоимости этапа контролируемой стимуляции в реализации программы ЭКО. Следует отметить, что при применении этих протоколов частота «бедного ответа» заметно возрастает и аргументированно их стоит назначать пациенткам старшего возраста с крайне сниженными показателями овариального резерва и подтвержденным плохим ответом (когда получали не более двух ооцитов) в предыдущих попытках стимуляции с использованием более агрессивных протоколов.

Длинный протокол со снижением дозы АГ-РГ: были сообщения о том, что уменьшение дозы антГн-РГ в 2-4 раза может улучшить ответ яичников и повысить эффективность лечения. Однако убедительных доказательств о преимуществах такой тактики не представлено.

Модифицированный протокол с антГн-РГ: предлагается на 1-й день менструального цикла однократно ввести антГн-РГ (0,25 мг), затем продолжать стимуляцию в обычном режиме и использовать антГн-РГ при достижении фолликулом диаметра 14 мм. Цель этого режима — десенситизация гипоталамо-гипофизарной системы для того, чтобы сформировать пул фолликулов для стимуляции гонадотропинами. Эффективность данной методики достоверно не оценена.

Сочетание в протоколе АГ-РГ и антГн-РГ: при проведении стимуляции яичников антГН-РГ назначают с 19-21 дня предыдущего менструального цикла до 2-го дня последующего, затем подключают гонадотропины. С момента достижения растущими фолликулами диаметра 14 мм назначают антГн-РГ, который используют до момента введения триггера овуляции. Этот протокол не завоевал популярности из-за высокой стоимости и отсутствия преимуществ по сравнению с другими режимами введения препаратов. Наоборот, при использовании описываемой схемы многими специалистами был установлен факт частой отмены циклов.

Двойная стимуляция: при изучении механизмов, приводящих к рекрутированию фолликулов, было обнаружено, что их созревание носит волнообразный характер, и таких волн за цикл всего 3-4, первая из которых начинается в лютеиновую фазу. Поэтому было решено попытаться продолжать стимуляцию малыми дозами гонадотропных гормонов после пункции ооцитов (малые дозы дают равномерный рост большего числа фолликулов, тогда как большие дозы дают резкий рост всего нескольких фолликулов). Это дало свои результаты и позволило в одном цикле получить ооциты два раза. Эмбрионы замораживают и переносят в последующих циклах. Результативность дискутабельна. Рациональность использования этого протокола обусловлена получением большего числа ооцитов за счет двух стимуляций в одном менструальном цикле и соответственно эмбрионов. Однако эту методику отличает большая дороговизна.

Следует отметить, что ЭКО в естественном цикле отличает низкая частота наступления беременности даже у пациенток молодого возраста с вполне нормальным овариальным резервом, поскольку до трети фолликулов могут не содержать полноценную яйцеклетку. Кроме того, для ооцитов, полученных в естественных циклах, характерна относительно невысокая частота оплодотворения (не более 70%), а у полученных из таких ооцитов эмбрионов отмечается невысокая частота дробления (не более 50%) и имплантации (не более 15%). Все это приводит к тому, что результативность таких циклов по показателю частоты наступления беременности на уровне 3-4%. Рекомендация о целесообразности применения методики ЭКО в естественном цикле у женщин старшего репродуктивного возраста имеет такую же аргументацию, как и «мягкие» протоколы — экономия на препаратах гонадотропных гормонов .

При использовании IVM, предложенной авторами, получают ооциты при пунктировании фолликулов диаметром 10-12 мм. Далее обеспечивают их дозревание в специальных средах, последующее их оплодотворение (с использованием ИКСИ) и в дальнейшем выполняют перенос полученных эмбрионов или бластоцист .

Однако четкой доказательной базы эффективности описанных выше методик пока нет. Есть отдельные обнадеживающие исследования зарубежных и отечественных специалистов (А. А. Смирнова и соавт., 2016; Байкошкарова С. Б. и соавт., 2015; Никитин С. В. и соавт., 2016, С. Ю. Калинченко и соавт., 2016; Kuang Y. et al., 2014; Moffat R. et al, 2014; Ubaldi F. M., 2016) именно у пациенток с низким овариальным резервом старшей возрастной группы с прогнозом «бедного ответа».

Ряд авторов описывает методики применения стимуляторов яичникового ответа до протоколов стимуляции суперовуляции: андрогенный и эстрогенный прайминг, использование гормона роста (СТГ), оральные контрацептивы, заместительная гормональная терапия, гестагены, биологически активные добавки.

По сообщениям Е. В. Крстич (2010) и К. В. Краснопольской и соавт. (2010), «андрогенный прайминг» полезен именно для тех «возрастных» пациенток, у которых имеет место снижение андрогенсекретирующей функции яичников, проявляющаяся в аномально низких значениях общего тестостерона (менее 1 нмоль/л). По наблюдению этих авторов, гипоандрогенное состояние является самостоятельным фактором риска «бедного ответа», которое не коррелирует с уменьшением овариального резерва. Таким пациенткам эти авторы рекомендуют назначать тестостерон-содержащий препарат Андрогель (в суточной дозе 2.5 г геля, содержащего 25 мг тестостерона) в течение 15-20 дней до начала стимуляции гонадотропинами, что позволяет снизить частоту «бедного ответа». Механизм положительного эффекта «андрогенного прайминга» у таких пациенток авторы связывают со способностью андрогенов активизировать ранний рекрутинг фолликулов в созревающую когорту, увеличить экспрессию рецепторов к ФСГ на клетках гранулезы малых антральных фолликулов и поддерживать адекватную чувствительность ФСГ-рецепторов на всех гормонально-зависимых этапах фолликулогенеза.

Авторы, предложившие методику эстрогенного прайминга (эстрогены в лютеиновую фазу предыдущего цикла), исходили из того, что когорта фолликулов, которая вступит в активный фолликулогенез в следующем менструальном цикле, формируется в середине лютеиновой фазы предыдущего. Назначение эстрогенов в этот период, по мнению разработчиков данной методики, может пролонгировать стимулирующий эффект ФСГ в лютеиновой фазе цикла, а также увеличивать уровень продукции эстрогенов растущими фолликулами, обеспечивая их более быстрый рост.

Сообщений о возможном влиянии гормонов роста (СТГ) на функцию яичников чрезвычайно мало. Существуют единичные публикации ряда авторов (Аншина М. Б., 1998; Kucuk T. et al., 2008; Kolibianakis E. M. et al., 2009).

Смысл назначения оральных контрацептивов в монофазном режиме заключается во временном торможении гипоталамо-гипофизарно-яичниковой системы, после чего в последующем цикле вероятен так называемый ребаунд-эффект, т. е. активация деятельности этой системы. Представленная методика зачастую оказывается эффективной у пациенток молодого возраста, у которых наблюдается олигоменорея и ановуляция на фоне достаточной или же высокой концентрации эстрогенов. В то же время назначение оральных контрацептивов женщинам со сниженными показателями овариального резерва и сопутствующей гипоэстрогенией вряд ли является перспективным методом надежного предупреждения «бедного ответа».

Назначение гормонов в циклическом режиме (заместительная гормонотерапия) — эстрогены в возрастающей дозе в фолликулярную фазу, препараты прогестерона совместно с эстрогенами в лютеиновую фазу — имитирует физиологические колебания уровней половых стероидов в течение менструального цикла. Возможно, это полезно в обеспечении трансформации эндометрия, но вряд ли может положительно сказаться на последующем ответе яичников на стимуляцию их функции.

Гестагены как предварительное лечение, скорее всего, не имеют отношения к последующей способности яичников отвечать на стимуляцию гонадотропинами. Показаниями для назначений этих препаратов являются наличие фолликулярных кист в яичниках, необходимость фиксации менструальноподобной реакции и обеспечение адекватной трансформации эндометрия.

Неспецифические средства — биологически активные добавки, фито-эстрогены, гомеопатические препараты — в настоящее время довольно широко используют не только врачи, но и пациенты, занимающиеся самолечением. При «бедном ответе» яичников и/или многочисленных неудачных попытках ЭКО — это «средства отчаяния».

Приходится признать, что на сегодняшний день результаты различных метаанализов так и не подтвердили достоверной эффективности каких-либо определенных лекарственных препаратов .

Другими возможными путями решения результативности программ у пациенток старшей возрастной группы с прогнозом бедного ответа может стать использование комплексных программ ЭКО с параллельным использованием донорских ооцитов (нативных или витрифицированных) или донорских эмбрионов. Проведение таких программ ЭКО, выполняемых за счет средств ТФ ОМС, возможно с параллельным использованием в этой программе донорских ооцитов (нативных или витрифицированных) или донорских эмбрионов за счет средств самой пациентки после подписания супружеской парой всех необходимых юридических документов. При этом на этапе переноса эмбрионов всегда переносится не менее двух эмбрионов. Один эмбрион, полученный путем оплодотворения спермой мужа ооцитов пациентки (обычно низкого качества), другой — либо полученный путем оплодотворения донорских ооцитов спермой мужа (обычно хорошего качества), либо донорский эмбрион. При отсутствии эмбрионов, полученных от оплодотворения спермой мужа ооцитов пациентки, осуществляется перенос двух эмбрионов, полученных путем оплодотворения донорских ооцитов спермой мужа или двух донорских эмбриона.

Целью данного исследования было дать сравнительную характеристику эффективности базовых программам ЭКО и ПЭ, проводимых в условиях государственной поддержки за счет средств ТФ ОМС и комплексных программ с сочетанным финансированием (наряду со средствами ТФ ОМС параллельная оплата ДО, ДЭ или донорской программы из собственных средств) у пациенток старшего репродуктивного возраста с низким овариальным резервом и прогнозом бедного ответа.

Материалы и методы исследования

Нами были проанализированы исходы программ, выполняемые за счет средств ТФ ОМС на базе отделения вспомогательных репродуктивных технологий МОПЦ за 2015 и 2016 гг. у пациенток старшего репродуктивного возраста с прогнозом «бедного ответа», которые были разделены на две группы. 1-ю группу составили 69 пациенток, которым была проведена базовая программа ЭКО и ПЭ в 2015 г., во 2-ю группу вошло 60 пациенток с проведенной как базовой, так и комплексной программой ЭКО и ПЭ в 2016 г. Также была выделена 2а подгруппа — 26 пациенток из 60, которым была проведена комплексная программа ЭКО и ПЭ. Все супружеские пары были обследованы по единому стандарту (Приказ № 107н МЗ РФ), а в период проведения программы — согласно Приказу № 556 от 30.10.12.

Отбор пациентов для программ вспомогательных репродуктивных технологий за счет средств ТФ ОМС проводился по критериям, рекомендованным и изложенным в Информационно-методическом письме МЗ РФ и Федерального Фонда ОМС № 15-4/10/2-1777 и № 1359/30-4 от 18.03.2014 г. «О направлении граждан Российской Федерации для проведения процедуры ЭКО в 2014», а также в соответствии с Приказом МЗ РФ № 916н от 10.12.13 «О перечне видов высокотехнологичной помощи». Критериями отбора пациенток для ведения комплексных программ с параллельным использованием донорских ооцитов являлось снижение овариального резерва, определяемое Болонскими критериями ESHRE. Основной регламентирующей документацией, дающей возможность проводить комплексные программы, послужили Приказ МЗ РФ № 107н от 30.08.2012, Приказ МЗ РФ № 556 от 30.10.12, информационно-методическое письмо МЗ РФ от 29.03.2016. В Приказе № 107н от 30.08.2012 «О порядке использования вспомогательных репродуктивных технологий, противопоказаниях и ограничениях к их применению», п. 22а: «Ограничениями для применения базовой программы ЭКО является снижение овариального резерва (по данным УЗИ и уровня АМГ в крови)»; в п. 22б отмечено, что «при недостаточном ответе яичников на ССО, неоднократном получении эмбрионов низкого качества, перенос которых не приводил к наступлению беременности, показано использование донорских эмбрионов и/или криоконсервированных половых клеток и эмбрионов». Приказом № 556 от 30.10.12 г. «Об утверждении стандарта медицинской помощи при бесплодии с использованием вспомогательных репродуктивных технологий» обозначены процедуры и лекарственные препараты базовой программы ЭКО, оплачиваемые из средств ТФ ОМС. Информационно-методическое письмо МЗ РФ и ФОМС от 22 марта 2016 г. «О направлении граждан Российской Федерации для проведения процедуры ЭКО» указывает на возможность в рамках базовой программы ЭКО, финансируемой за счет ТФ ОМС, использовать дополнительные медицинские услуги, оплата которых производится за счет иных средств. «Оплата медицинских услуг при проведении процедуры ЭКО в рамках базовой программы ОМС, не предусмотренных стандартом медицинской помощи при бесплодии с использованием вспомогательных репродуктивных технологий … (использование донорских ооцитов, донорской спермы, донорской спермы, донорских эмбрионов, суррогатное материнство, криоконсервация и хранение своих половых клеток, тканей репродуктивных органов и эмбрионов) производится дополнительно за счет личных средств и иных средств, предусмотренных законодательством РФ».

Стимуляция суперовуляции проводилась по длинному протоколу с мини-дозами АГ-РГ (Диферелин дейли форма по 0,1 мг вводили 0,05-0,025 мг). Выбор препарата определялся его безопасностью, эффективностью и простыми условиями хранения). Стимуляция яичников осуществлялась рекомбинантным фолликулостимулирующим гормоном человека Гонал-Ф. Выбор препарата определялся его качеством, эффективностью и разнообразием удобных форм и доз введения (флаконы по 75 МЕ, шприц-ручки по 300 МЕ с уменьшающейся минимальной дозировкой и шагом введения препарата). Наряду с рекомбинантным фолликулостимулирующим гормоном с целью оптимизации дозревания фолликулов применялись мочевые гонадотропины (Менопур). Суточная доза ГТ — 300 МЕ. В качестве триггера овуляции использовался рХГЧ — Овитрель 250 мкг. Поддержка лютеиновой фазы проводилась микронизированным прогестероном (Утрожестан). Подготовка эндометрия в программах осуществлялась трансдермальными формами эстрогенов. Критериями назначения препаратов эстрогенов являлись толщина эндометрия по УЗИ и гормональный профиль. Выбор препарата определялся удобством введения.

Результаты исследования

Все пациентки до программы были обследованы согласно Приказу МЗ РФ № 107н от 30.08.2012, а в период проведения программы — согласно Приказу № 556 от 30.10.12. По основным показателям овариального резерва, среднего возраста, анамнестическим данным группы были сопоставимы. Средний возраст пациенток первой группы составил 39,8 года, второй группы — 40,1 года (рис. 2). Показатели овариального резерва в первой группе составили: уровень ФСГ — 11,2 МЕ/л, АМГ — 0,3 нг/мл, количество антральных фолликулов, определяемых по УЗИ, — 4,8. Во второй группе эти показатели: ФСГ — 10,8 МЕ/л, АМГ — 0,32 нг/мл, количество антральных фолликулов — 5,1 (рис. 3).

У пациенток 1-й и 2-й групп женское бесплодие сочеталось с мужским фактором — астенотератозооспермией в различных сочетаниях умеренной степени выраженности в 42%.

Культивирование эмбрионов проводилось до 5 суток, оценка их качества проводилось по шкале Гарднера. Количество получаемых ооцитов/из них зрелых на одну пациентку составило (р < 0,05): в 1-й группе 3,7 ± 1,1/2,7 ± 1,8, в 2-й группе — 4,7 ± 2,2/4,1 ± 1,2, во 2а группе — 7,7 ± 3,4/5,7 ± 2.4.

Количество полученных эмбрионов на одну пациентку/из них эмбрионов высшего качества (р < 0,05): в 1-й группе — 2,1 ± 1,1/1,1 ± 0,4, в 2-й группе — 2,9 ± 1,4/1,8 ± 0,8; во 2 а группе — 4,4 ± 1,8/2,7 ± 1,2. У всех пациенток перенос эмбрионов проводился на 5-е сутки культивирования.

При проведении комплексных программ осуществлялся перенос двух эмбрионов. Один эмбрион, полученный путем оплодотворения ооцитов пациентки спермой мужа (среднего или низкого качества), второй — донорский, полученный путем оплодотворения донорских ооцитов спермой мужа (высокого качества). В программах с использованием донорских эмбрионов переносились эмбрионы высокого качества. При отсутствии «собственных» эмбрионов проводился перенос двух донорских эмбрионов либо эмбрионов, полученных путем оплодотворения донорских ооцитов спермой мужа. Эффективность программы ЭКО (частота наступления беременности) составила: в 1-й группе — 11,6% на цикл; во 2-й группе — 21,6% на цикл (13), во 2а группе — 38,4% на цикл (10) (рис. 4).

Выводы

Проведена сравнительная характеристика эффективности базовых программам ЭКО и ПЭ, проводимых в условиях государственной поддержки за счет средств ТФ ОМС и комплексных программ с сочетанным финансированием (наряду со средствами ТФ ОМС параллельная оплата ДО, ДЭ или донорской программы из собственных средств) у пациенток старшего репродуктивного возраста с низким овариальным резервом и прогнозом бедного ответа. В целом за отчетный период результативность программ, выполненных в 2016 г., составила 11,6%, а в 2016 г. — 21.6%, то есть увеличилась на 10%. Причем результативность только комплексных программ сопоставима с результативностью программ у пациенток до 35 лет и равна 38,4%. Это говорит о том, что возраст — важный фактор эффективности программ ЭКО и ПЭ, определяющий количество полученных при стимуляции суперовуляции ооцитов, качество переносимых эмбрионов, частоту наступления индуцированной беременности. Применение комплексных программ ЭКО и ПЭ при государственной поддержке у пациенток старше 38 лет значительно улучшает их результативность, а также позволяет пациенткам попытаться использовать полностью свой овариальный резерв. В ряде случаев донорские эмбрионы и эмбрионы, полученные путем оплодотворения донорских ооцитов спермой мужа, способствуют имплантации собственных эмбрионов невысокого качества. Полученные данные требуют дальнейшего исследования и анализа.

Литература

1. Российская ассоциация репродукции человека, Регистр ВРТ, отчет за 2014.
2. Боярский К. Ю. Факторы, определяющие овариальный резерв // Акуш. и жен. беспл. 2009, 2: 65-69.
3. Назаренко Т. А., Мишиева Н. Г. Бесплодие и возраст. М.: МЕДпресс-информ, 2014. С. 7-22.
4. ЕSHRE consensus on the definition of ‘poor response’ to ovarian stimulation for in vitro fertilization: the Bologna criteria // Hum. Reprod. 2011, 26 (7): 1616-1624. DOI: 0.1093/humrep/der092 First published online: April 19, 2011).
5. Рудакова Е. Б., Замаховская Л. Ю., Стрижова Т. В. и другие. Исходы экстракорпорального оплодотворения как мультифакторная проблема клинической репродуктологии // Медицинский совет. 2015, 9: 46-54.
6. Бедный ответ. М.: МЕДпресс-информ, 2013. С. 40.
7. Назаренко Т. А. Стимуляция функции яичников. М.: МЕДпресс-информ, 2013. С. 82-83.
8. Назаренко Т. А., Краснопольская К. В. Бедный ответ, М.: МЕДпресс-информ, 2013. С. 45-51.
9. Краснопольская К. В. Клинические аспекты лечения бесплодия в браке. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. С. 240.
10. Назаренко Т. А., Краснопольская К. В. Бедный ответ. М.: МЕДпресс-информ, 2013. С. 4-44.

Е. Б. Рудакова 1 , доктор медицинских наук, профессор
Е. А. Федорова
И. В. Сергеева

ГБУЗ МО МОПЦ, Балашиха

Возможности улучшения результативности ЭКО и ПЭ у пациенток старшего репродуктивного возраста/ Е. Б. Рудакова, Е. А. Федорова, И. В. Сергеева

Для цитирования: Лечащий врач №12/2017; Номера страниц в выпуске: 11-16

Теги: бесплодие, беременность, поздний репродуктивный возраст

Эмбриология

Эмбриология – наука о жизни до рождения.

Первые сведения о развитии зародыша человека в Древней Индии, Древней Греции

в VIII – VI в. до н.э.

Гиппократ «О семимесячном плоде», «О сверхоплодотворении»,

«О природе ребенка»

Леонардо да Винчи – один из основателей эмбриологии, как точной науки.

«Вены ребенка развиваются не в веществе матки его матери, но в плаценте, которая служит как бы сорочкой, одевающей матку изнутри и связана с ней с помощью ворсинок»

Петр I издал указы, предписывающие нежизнеспособных уродов птиц, зверей и человека сдавать в аптеки или коменданту города.

В 1718 г. возникла коллекция Кунсткамеры.

Карл Рейхерт в 1873 году впервые описал зародыш человека в очень раннем возрасте 12 – 13 дней и сделал зарисовки.

Прогенез.

Яйцеклетка, строение, классификация. Яйцеклетка женщины, трубный период развития.

· Ядро, ядрышко. Гаплоидный набор хромосом.

· Цитоплазма, органеллы, много РНК, отсутствует клеточный центр.

· Включения желтка – фосфо- и липопротеины.

· Кортикальные гранулы – производное комплекса Гольджи.

· Мультивезикулярные тельца – производные лизосом.

Типы яйцеклеток

· Алецитальные – не содержит желтка, окружены желточными клетками (беспозвоночные, например, плоские черви).

· Изолецитальные (гр.iso – ровно, однородно), олиголецитальные – желтка мало, равномерно в цитоплазме.

§ а) первично изолецитальные (хордовые, например ланцетник).

§ б) вторично изолецитальные (млекопитающие).

· Телолецитальные (telos – конец), полилецитальные – желтка много, у одного конца (вегетативного полюса), у другого анимального полюса – ядро и органеллы.

§ Умеренно телолецитальные (амфибии).

§ Резко телолецитальные (костистые рыбы, пресмыкающиеся, птицы).

· Центролецитальные – желток в центре клетки вокруг ядра (насекомые).

Яйцеклетка женщины – вторично изолецитальная.

Диаметр 120-130 мкм.

Две дополнительные оболочки:

§ zona pellucida – блестящая оболочка (гликопротеид Zp3 – рецептор для сперматозоидов);

§ corona radiatа – лучистый венец.

Трубный период развития. (около 5 суток)

После овуляции овоцит II порядка захватывают фибрии маточной трубы. В трубе происходит:

Второе деление мейоза и образование из овоцита II порядка яйцеклетки;

Оплодотворение;

Дробление.

Важнейшую роль играет слизистый секрет маточных труб.

Яйцеклетка способна к оплодотворению в течение 1-х суток, жизнеспособна – 2 суток.

Строение сперматозоида, концентрация, подвижность, изменения в женских половых путях.

Описал А. Левенгук в 1677 г.

Длина у человека около 70 мкм.

Две части:

· Головка;

Головка.

· Ядро с гаплоидным набором хромосом, очень плотно упакованных.

· Ядерные белки не гистоны, а богатые аргинином и цистеином – за счет них плотная упаковка.

· В конденсированном состоянии генетический материал защищен от повреждений.

· Акросома – спереди от ядра уплощенный пузырек, производное комплекса Гольджи. Содержит ферменты, необходимые для проникновения сперматозоида в яйцеклетку.

В хвосте 4 части.

· I - шейка

· II – промежуточная

· III - основная

· IV – концевая часть.

Шейка содержит 2 центриоли.

· От проксимальной центриоли отходит аксонема, которая имеет строение реснички

· Дистальная центриоль кольцевидной формы

Промежуточная часть.

· Митохондрии, расположенные по спирали

· Вокруг аксонемы

Основная часть.

· Аксонема.

· Вокруг волокнистая оболочка (тонкофибрильное влагалище).

Концевая часть.

· Аксонема.

· Покрыта непосредственно плазмолеммой.

ü Концентрация сперматозоидов в норме 20-200млн в мл спермы

ü Меньше – олигоспермия, мужское бесплодие.

ü 15% супружеских пар страдают бесплодием

ü 50% - мужское бесплодие!

Подвижность сперматозоидов в среднем 83%.

Приобретают подвижность в семявыносящих путях

Сеть семенника – 0,3 – 0,6%

Головка придатка – 7%

Хвост – 40%

ü Важнейшее значение играет секрет простаты – «второе сердце мужчины»

· Скорость движения сперматозоида – 2-3 мм/мин

· Путь до яичника 30 см преодолевает за 1,5 – 2 часа.

· Подвижность сохраняет до 5 сут., к оплодотворению способны 2 сут.

В кислой среде влагалища сперматозоид погибает через 2,5 часа.

В маточных трубах оптимальная среда:

· Капацитация (активизация) – увеличение подвижности, потребление кислорода, изменения в цитолемме.

· Фагоцитоз неполноценных сперматозоидов, в норме до 10-50 %.

Эмбриогенез человека занимает 10 лунных (28 дней) или 9 календарных месяцев.

Периоды эмбриогенеза.

· Начальный – 1-ая неделя; оплодотворение, дробление.

· Зародышевый – 2-8 неделя; гаструляция и закладка осевых зачатков органов – 2-3 неделя;

гисто – органогенез – 4-8 неделя.

· Плодный – с 3-го месяца до рождения.

Оплодотворение.

Слияние мужской и женской половых клеток с образованием одноклеточного организма – зиготы.

3 фазы:

· Сближение и дистантное взаимодействие.

o Пассивное движение яйцеклетки с током жидкости по яйцеводу.

o Активное движение сперматозоидов.

§ Отрицательный реотаксис – против тока жидкости.

§ Хемотаксис – по градиенту концентрации гиногамонов, выделяемых яйцеклеткой.

§ Электротаксис – электрическое взаимодействие между гаметами.

· Контактное взаимодействие гамет.

o Связывание гамет – множество сперматозоидов связывается с зернистой оболочкой яйцеклетки.

o Акросомная реакция – активизация ферментов акросомы, удаление фолликулярных клеток (денуация).

o Прикрепление к плазмолемме – один сперматозоид преодолевает оболочки, прикрепляется к плазмолемме. Выпячивание цитоплазмы – бугорок оплодотворения.

· Проникновение сперматозоида в яйцеклетку

o Головка и шейка (ядро и центриоли) одного сперматозоида проникают в яйцеклетку (моноспермия).

o Кортикальная реакция – кортикальные гранулы опорожняются в пространство между плазмолеммой и блестящей оболочкой.

o Блестящая оболочка уплотняется, образует оболочку оплодотворения, не пропускающая другие сперматозоиды.

o Сближение ядер – стадия двух пронуклеосов (12 часов).

o Слияние ядер – образование синкариона.

o Сразу начинается первое деление («материнская звезда» в метафазе).

Дробление.

· Ряд митотических делений без последующего увеличений дочерних клеток (бластомеров) до массы материнских. В интерфазе отсутствует G1-период.

· В результате дробление образуется бластула.

· Тип дробления зависит от количества и распределения желтка.

Ланцетник (яйцеклетка первичная изолецитальная).

· Дробление полное, равномерное, синхронное.

· Образуется целобластула.

Амфибии (яйцеклетка умеренно телолецитальная).

· Дробление полное, неравномерное, асинхронное.

· Амфибластула.

Птицы (яйцеклетка резко телолецитальная).

· Дробление неполное.

· Дискобластула.

Человек (яйцеклетка вторично изолецитальная).

· Дробление полное, асинхронное.

· Стадии 2,3,4,5,6,8,9,12,16 до 107 бластомеров.

· Неравномерное, неравноценное.

Два типа бластомеров.

· В центре – крупные темные бластомеры образуют эмбриобласт (зародыш).

· Снаружи – мелкие светлые образуют трофобласт (гр. trophe – пища).

ü Вначале зародыш имеет вид тутовой ягоды – морула

ü Затем появляется полость с жидкостью – бластоциста

ü На 5 сутки ХЭТЧИНГ – выклев бластоциста выходит из zona pellucida, попадает в матку.

Близнецы.

ü Первые бластомеры могут давать самостоятельные организмы (8 бластомеров) – однояйцевые близнецы.

ü Оплодотворение нескольких яйцеклеток – разнояйцевые близнецы.

«Погасите свечу, они выходят на свет»!!!

ü В 1755г. крестьянин села Введенского Яков Кириллов 60 лет был представлен ко двору. Первая жена родила 57 детей (4х4 + 7х3 + 10х2), вторая – 15 детей (1х3 + 6х2). Всего 72 ребенка.

ü 1782г. 27 февраля была прислана ведомость в Москву он Никольского монастыря Шуйского уезда. Федор Васильев 75 лет женатый 2 раза имел 87 детей.

Закономерность.

ü На 87 обычных родов – одна двойня.

ü На 87 двоен – одна тройня.

Имплантация (Нидация).

· Внедрение зародыша в эндометрий

· Начинается на 7 сутки, длится 40 часов

· 1 стадия. Адгезия (прилипание) – с помощью трофобласта зародыш прикрепляется к эндометрию.

· 2 стадия. Инвазия (проникновение).

o Трофобласт диффиринцируется на 2 слоя.

§ Цитотрофобласт.

§ Симластотрофобласт.

Симпластотрофобласт выделяет ферменты, разрушающие эндометрий.

Зародыш погружается в толщу эндометрия, дефект регенерирует.

Питание зародыша.

o В начале гистеотрофный тип – за счёт разрушенных тканей эндометрия;

o Затем гематотрофный тип – за счёт материнской крови.

Эмбриологические аспекты экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбриона (ЭКО и ПЭ).

Около 15 % супружеских пар бесплодны.

Мужское и женское бесплодие 50:50 %.

· Метод разработали англичанине: эмбриолог Роберт Эдвардс и гинеколог Патрик Стептоу.

· Первый «пробирочный» ребёнок родился в Англии в 1978 году - (в России в 1986 году).

· В 1907 году русский исследователь Груздев В.С. проводил опыты на кроликах. Забирал из яичников яйцеклетки, смешивая их со сперматозоидами, и вводил в яйцеводы.

Показания для ЭКО.

· Абсолютное женское бесплодие: полная непроходимость или отсутствие маточных труб.

Этапы ЭКО.

· Исключение мужского фактора бесплодия.

· Обследование женщины.

o Гормональный статус (ФСГ, ЛГ, пролактин, тестостерон, эстродиол и др.).

o Инфекции, передаваемые половым путём.

o Ультразвуковое исследование.

o Томография головного мозга (гипофиз).

o Лапороскопия и гистероскопия (наиболее информативные методы).

· Стимуляция суперовуляции.

o Стимуляция фолликулогенеза препаратами ФСГ.

o Введение в средине цикла овуляторной дозы хорионического гонадотропина (ХГ) - аналога лютеотропного гормона (ЛГ).

· Трансвагинальная пункция и аспирация овоцитов (8-10 овоцитов) через 36 часов после введения овоцитов ХГ.

· Перенос овоцитов в культуральную среду. Оценка качества овоцитов под микроскопом (критерии степени зрелости: наличие одного полярного тельца, состояние cumulus, corona radiata и др.) .

· Отбор зрелых овоцитов.

· Обработка спермы, градиентное центрифугирование с целью отбора фракции наиболее фертильных (активных) сперматозоидов.

· Оплодотворение.

o Добавление в культаральную среду спермы, не менее 50 тыс. подвижных сперматозоидов на 1 овоцит.

o Оптимально через 4 часа после появления одного полярного тельца.

· Культивирование в среде 2 суток (общепринято)

o Дробление: от 2-4 до 6-8 бластомеров.

· Оценка качества зародышей под микроскопом

· Трансвагинальный перенос 2-3 зародышей в матку.

o Остальных зародышей консервируют в жидком азоте.

Вероятность наступления беременности не более чем в 30% на одну попытку

Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида. (ИКСИ-метод)

· Показание: мужское бесплодие (олигоспермия, азооспермия – полное отсутствие эякулята и др.).

· Впервые беременность после ИКСИ получена в 1992 году в Бельгии.

· До этого использовалась донорская сперма.

· При отсутствие эякулята производят пункцию:

o Придатка

· Биоптат помещают в культуральную среду.

· Выбирают 1 нормальный, подвижный сперматозоид.

Оборудование.

· Инвертированный микроскоп на антивибрационном столе

· Два микроманипулятора

· Стеклянные микроинструменты:

o Присоска для яйцеклетки

o Микроигла для сперматозоида.

Этапы.

· Иммобилизация сперматозоида – перетирание хвоста микроиглой о дно чашки.

· Засасывание сперматозоида, первым в пипетку заходит хвост.

· Ориентация и закрепление ооцита на присоске - полярное тельце на 12 или 6 часов (под ним метафизарная пластинка).

· Прокол ооцита на 3 часа – наименьшее повреждение генетического материала (метафизарной пластины)

Донация ооцитов.

Показания: Отсутствие яичников или нефункционирующие яичники.

· Оплодотворяется донорская яйцеклетка по программе ЭКО, зародыш переносится в матку

· Дети генетически чужеродные для родивших их матерей.

· Перед пересадкой зародыша проводятся заместительная гормонотерапия, т.к. у женщины без яичников происходит уменьшение размеров матки и атрофия эндометрия.

· В течение 2-4 месяцев назначаются препараты эстрогенов и прогестерона согласно фазам менструального цикла.

Гаструляция (лат. gaster – желудок).

Процессы размножения, перемещения и дифференцировки клеток, в результате которых образуются зародышевые листки (эктодерма, мезодерма, энтодерма). Зародыш становится многослойным.

Способы гаструляции:

· Инвагинация (ланцетник).

· Эпиболия (амфибии).

· Иммиграция (птицы, млекопитающие).

· Деламинация (высшие позвоночные).

Похожая информация.

Изобретение относится к области медицины, а именно к области гинекологии и репродуктологии, и касается способа отбора пациенток с синдромом "пустых" фолликулов (СПФ) для проведения программы ЭКО и ПЭ донорскими ооцитами. Способ осуществляется посредством определения в фолликулярной жидкости у пациенток с СПФ содержания фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), инсулиноподобного фактора роста (ИПФР-1) и человеческого хорионического гонадотропина (чХГ) и рассчитывают дифференциальный показатель ДП по формуле:

ДП=ехр(ПП)/1+ехрПП), где

ПП=1,821+1×ФСГ-0,18×ИПФР-1+0,136×чХГ

Ехр - экспоненциальная функция,

и при показателе ДП меньше 0,5 развитие СПФ носит абсолютный характер и пациентке рекомендуют донацию офитов, при ДП более 0,5 развитие СПФ носит спорадический характер и пациенте рекомендуют повторные лечебные циклы ЭКО. Преимущество изобретения заключается в разработке способа прогнозирования проведения ЭКО и ПЭ. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии и репродуктологии, и найдет применение в программах ЭКО и ПЭ с целью повышения частоты наступления беременности.

Накопленным за последние 25 лет опытом лечения бесплодия методом ЭКО и ПЭ доказана его высокая эффективность. Если в 70-х - начале 80-х годов проводилось описание лишь единичных случаев успешного лечения больных методом ЭКО, то в настоящее время необходимо признать, что благодаря его внедрению в практику появилась реальная возможность эффективно преодолевать практически все известные формы женского и мужского бесплодия (Овсянникова Т.В. и соавт., 1998; Орлов В.И. и соавт., 2000). В медицинской науке известны единичные методы лечения, которые столь стремительно претерпевали эволюционные изменения, направленные на преодоление глобальных проблем, возникавших на этапе их становления. При всей неопровержимости доказательств успешности и состоятельности экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов в полость матки после успешного рождения первого ребенка, репродуктологи столкнулись с серьезными трудностями, ограничивающими широкое распространение метода (Аншина М.Б., 1995; Кулаков В.И. и соавт., 2000; Айламазян Э.К. и соавт., 2000).

Почти два десятилетия прошло с тех пор, как впервые Coulam et al., (1986) был описан новый синдром - синдром «пустых» фолликулов (СПФ). По определению автора, это состояние характеризуется невозможностью аспирации ооцитов из преовуляторных фолликулов в циклах экстракорпорального оплодотворения из-за их отсутствия. Возникновение этого синдрома спорадическое, и в настоящее время не может быть диагностировано (ни эндокринологически, ни сонографически) по какой-то определенной реакции яичников на стимуляцию суперовуляции (Penarrulia J, и соавт., 1999; Zreik Т.О. и соавт., 2000).

Существуют разноречивые мнения в отношении этиологического фактора, механизмов развития, диагностики и способов лечения данного синдрома. Несмотря на огромный интерес со стороны репродуктологов к этому «феномену», он остается до настоящего времени малоизученным.

При относительно низкой частоте встречаемости СПФ практически нерешенными являются вопросы, связанные с выбором дальнейшей тактики ведения больных, целесообразностью последующих программ ЭКО и необходимостью использования донорских ооцитов. Развитие ооцитов в растущем пуле фолликулов во многом определяется составом фолликулярной жидкости, куда адсорбируются из крови или секретируются клетками гранулезы гормоны и факторы роста (Светлаков А.В. и соавт., 2002; Бурлев В.А. и соавт., 1998). Помимо этого, при изучении биохимического состава фолликулярной жидкости отмечена цикличность изменений параметров антральной среды в зависимости от стадий развития фолликула (Боярский К.Ю., 2002; Бурлев В.А. и соавт., 1999; Чернуха Г.Е. и соавт., 1996). Биологически активные соединения, содержащиеся в антральной полости фолликула, составляют микроокружение, в котором развивается ооцит. Как избыток, так и недостаток этих соединений в фолликулярной жидкости может оказывать выраженное негативное действие на развитие ооцита (Феськов А.М., 1990; Воробьева О.А. и соавт., 1998; Потин В.В. и соавт., 1993). Несмотря на значимость полученных в настоящее время данных, а именно возможность прогнозирования синдрома «пустых» фолликулов по гормональному составу крови, в конкретном лечебном цикле, нет уверенности в его повторном развитии в других циклах стимуляции.

Отсутствие четкой тактики ведения пациенток с СПФ создает прецеденты многократной безуспешной стимуляции яичников, что отрицательно влияет как на здоровье и психоэмоциональное состояние женщин, так и на материальное положение семьи. Помимо этого, отсутствие своевременных четких указаний со стороны врачей о целесообразности использования донорских ооцитов откладывает проведение необходимой программы на неопределенный срок и, как правило, решается самостоятельно пациенткой после серии неудачных попыток ЭКО.

В тех случаях, когда религиозные, культовые и этнические убеждения противоречат использованию донорских ооцитов, пациентка обрекается на «многолетние скитания» в медицинских центрах различного уровня. Все вышеизложенное явилось основанием для изучения данного синдрома, поиска и разработки дифференцированной тактики ведения пациенток, что и определило цель и задачи наших исследований.

В доступной научно-медицинской и патентной литературе нами не выявлены методики, позволяющие проводить аргументированный отбор женщин с синдромом СПФ для включения в следующие циклы программ ЭКО и ПЭ. Это послужило основанием считать заявляемое изобретение не имеющим прототипа.

Задача изобретения: разработка объективного и доступного, для широкого применения, позволяющего провести дифференцированный отбор пациенток с «абсолютной» и «спорадической» формами синдрома «пустых» фолликулов, что обоснует проведение у данного контингента больных программы «Донация ооцитов» с целью получения желанной беременности.

Поставленная задача решается тем, что у больной с синдромом «пустых» фолликулов производят исследование фолликулярной жидкости, в которой определяют уровень фолликулостимулирующего гормона, уровень инсулиноподобного фактора роста-I, уровень человеческого хорионического гонадотропина и рассчитывают дифференциальный показатель ДП по формуле: ДП=ехр(ПП)/(1+ехр(ПП)), где:

Ехр (х) - экспоненциальная функция,

ПП - промежуточная переменная, рассчитываемая по формуле:

ПП=1,821+1×ФСГ-0,18×ИПФР-I+0,136+чХГ, где:

ФСГ - ровень фолликулостимулирующего гормона в фолликулярной жидкости, мМЕ/мл;

ИПФР-I - уровень инсулиноподобного фактора роста в фолликулярной жидкости, нг/мл;

чХГ - уровень человеческого хорионического гонадотропина в фолликулярной жидкости, МЕ/мл,

если полученное значение ДП меньше 0,5, то у данной конкретной пациентки развитие синдрома «пустых» фолликулов является следствием нарушенных процессов фолликуло- и оогенеза и носит «абсолютный» характер, поэтому ей рекомендуют донацию ооцитов, а при значении ДП более 0,5 развитие СПФ носит случайный «спорадический» характер и возможно проводить повторные лечебные циклы ЭКО, с целью получения собственных ооцитов.

Промежуточная переменная вводится для упрощения записи основной диагностической формулы.

С целью проведения дифференциальной диагностики осуществляется сравнительный анализ содержания местных внутрияичниковых регуляторов антральной жидкости при помощи вышеуказанной формулы, полученой с использованием метода «логит регрессии», согласно негауссовскому распределению исходных данных. Использование математической обработки позволило нам выделить специфические для синдрома «пустых» фолликулов достоверно значимые факторы внутрияичниковой регуляции (ФСГ-фолликулостимулирующий гормон, чХГ - хорионический гонадотропин человеческий и ИПФР-I - инсулиноподобный фактор роста). Нашими исследованиями было доказано, что существуют две формы синдрома «пустых» фолликулов: «спорадическая» и «абсолютная».

Таким образом, полученные нами данные обнаруживают четкую зависимость между содержанием в крови ФСГ, ЛГ, эстрадиола, прогестерона, тестостерона, а в антральной жидкости - ФСГ, чХГ и ИПФР-I, в необходимом адекватном количестве, и полноценным фолликулогенезом. Выявленные различия, очевидно, связаны с обеспечением наиболее благоприятных условий для развития ооцитов в доминантном фолликуле в связи с важной ролью вышепредставленных регуляторов в процессах фолликулогенеза. Включение этих регуляторов в формулу имеет также и определенный биологический смысл. Согласно данным литературы (Enien W.M. и соавт., 1998; Roche J.F., 1996) фолликулостимулирующий гормон, иммунореактивный хорионический гонадотропин, а также инсулиноподобный фактор роста-I, ответственны за селекцию полноценного доминантного фолликула и подготовку кумулюс-ооцитного комплекса к последующей овуляции. Концентрация этих регуляторов определялась иммунофлюоресцентным методом с использованием специфических тест-систем. Сопоставительный анализ результатов иммунофлюоресцентных исследований с их дальнейшей математической обработкой свидетельствуют о большей информативности вышеописанной методики с целью отбора пациенток с синдромом «пустых» фолликулов: с его «абсолютной» и «спорадической» формами и в зависимости от полученных данных разрабатывать дальнейшую дифференцированную тактику их ведения в программах ВРТ.

Совпадение прогностических и диагностических критериев при отрицательном результате даже однократной пункции яичников (отсутствие ооцитов) является свидетельством «абсолютной» формы СПФ. При значениях дифференциального показателя, рассчитанного по фолликулярным маркерам менее 0,5 отсутствует целесообразность проведения дальнейших гонадотропных стимуляций и показано использование «донорских» ооцитов. Однако отсутствие диагностически значимого подтверждения «абсолютной» формы СПФ создает возможность продолжения лечебных циклов программ ВРТ.

Статистический анализ полученного комплекса данных проводился при помощи пакета «Анализ данных» и набора математических и статистических функций (Excel 2003), а также с использованием стандартных пакетов прикладного статистического анализа Statistica 6.0 и MegaStat. Достоверность дифференцированного отбора пациенток с «абсолютной» формой СПФ составляет 66,1%.

Анализ точности дифференциального показателя ДП приведен ниже:

где: ИП - число истинно положительных случаев в выборке,

ИО - число истинно отрицательных случаев,

ЛП - число ложноположительных случаев,

ЛО - число ложноотрицательных случаев.

Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами.

Больная Р-ва, история болезни №2341/222 поступила в Центр репродукции человека с целью проведения ей программы ЭКО и ПЭ. Больная предъявляет жалобы на бесплодие II в течение 8 лет. Из анамнеза известно, что больная в 1987 г. перенесла правостороннюю тубэктомию и субтотальную резекцию левого яичника по поводу трубной беременности справа, в 1992 г. резекцию правого яичника по поводу его кистозного изменения.

С целью получения когорты ооцитов ей была назначена стимуляция овуляции. При УЗ-исследовании определяли динамику роста лидирующего фолликула или когорты фолликулов и толщину эндометрия в соответствии с протоколом. У данной больной было зарегистрировано на момент проведения пункции 2 лидирующих фолликула в правом яичнике. Толщина эндометрия составила 8,5 мм.

По достижению зрелости фолликулами (на основании данных ультразвукового и гормонального мониторинга) пациентке назначена овуляторная доза ХГ («Прегнил») в количестве 5000-10000 ЕД. Момент назначения ХГ определяется в зависимости от срока достижения лидирующим фолликулом диаметра не менее 18 мм.

Аспирацию ооцитов и фолликулярной жидкости производили через 36 часов после введения овуляторной дозы ХГ раздельно из правого и левого яичника. С целью получения ооцитов из фолликулов яичников и фолликулярной жидкости производили трансвагинальную пункцию с помощью влагалищного датчика с частотой 5 МГц ультразвукового аппарата Aloka SSD-500.

При пункции фолликулов не было получено ни одного ооцита. В антральной жидкости, аспирированной из фолликулов, определили уровень ФСГ, чХГ и ИПФР-I иммунофлюоресцентным методом с использованием тест-систем: Delfia (Wallac Oy, Turku, Finland), «чХГ-ЭКО-ТЕСТ» (000 «Диатех-ЭМ», Россия), DSL-10-2 800 (группа компаний БиоХимМак, Россия), соответственно. Полученные концентрации этих внутрифолликулярных регуляторов: ФСГ-5,6 мМЕ/мл; ИПФР-I - 105,7 нг/мл; чХГ - 38 МЕ/мл, с целью исключения случайности выявленного синдрома «пустых» фолликулов у обследуемой больной проведена математическая обработка полученных данных, используя формулу расчета ПП и ДП:

ПП=1,821+1×5,6-0,18×105,7+0,136×38=(-6,30726).

Дифференциальный показатель ДП=ехр(-6,30726)/(1+ехр(-6,30726))=0,001819708.

Согласно полученному дифференциальному показателю (0,001819708), который менее 0,5 у данной пациентки «абсолютная» форма синдрома «пустых» фолликулов и поэтому ей была предложена с целью получения желанной беременности программа «Донация ооцитов».

Больная В-ва, история болезни №1389/158 поступила в Центр репродукции человека с целью проведения ей программы ЭКО и ПЭ. Больная предъявляет жалобы на бесплодие II в течение 7 лет. Из анамнеза известно, что больная в 1997 г. перенесла правостороннюю тубэктомию по поводу трубной беременности справа, в 1999 г. левостороннюю тубэктомию по поводу трубной беременности слева.

На этапе обследования перед программой ЭКО выявлен уреаплазмоз, гарднереллез, проведено противовоспалительное лечение (с эффектом). С целью получения когорты ооцитов ей была назначена стимуляция овуляции. УЗ-исследование, проведенное на момент пункции фолликулов, позволило зарегистрировать 9 лидирующих фолликулов. Толщина эндометрия 7,1 мм.

Больной была произведена пункция фолликулов и аспирация их содержимого, исследование которого не выявило ни одного ооцита, на основании чего был клинически подтвержден в данном цикле стимуляции синдром «пустых» фолликулов. Произведено определение уровней биологически активных веществ в антральной жидкости: ФСГ - 2,8 мМЕ/мл; ИПФР-I - 90 нг/мл; чХГ - 45 МЕ/мл. У обследуемой больной проведена математическая обработка полученных данных, используя формулу расчета ПП и ДП:

ПП=1,821+1×2,8-0,18×90+0,136×45=(-5,60152).

Дифференциальный показатель ДП=ехр(-5,60152)/(1+ехр(-5,60152))=0,003678681.

Согласно полученному дифференциальному показателю (0,003678681), который менее 0,5 у данной пациентки «абсолютная» форма синдрома «пустых» фолликулов и поэтому ей была предложена с целью получения желанной беременности программа «Донация ооцитов».

Больная С-ва, история болезни №769/56 поступила в Центр репродукции человека с целью проведения ей программы ЭКО и ПЭ. Больная предъявляет жалобы на бесплодие II в течение 5 лет. Из анамнеза известно, что больная в 2000 г. перенесла левостороннюю тубэктомию по поводу трубной беременности слева, в 2001 г. пластика правой трубы матки по поводу трубной беременности справа.

На этапе обследования перед программой ЭКО сопутствующей патологии не выявлено. С целью получения когорты ооцитов ей была назначена стимуляция овуляции. УЗ-исследование, проведенное на момент пункции фолликулов, позволило зарегистрировать 5 лидирующих фолликула в левом яичнике и 2 - в правом. Толщина эндометрия 11,2 мм.

Пункция фолликулов и аспирация их содержимого клинически подтвердили существование у представленной больной, в данной программе, СПФ, так как исследование пунктата не выявило ни одного ооцита.

С целью уточнения дальнейшей тактики ведения этой пациентки произведено определение уровней биологически активных веществ в полученной антральной жидкости: ФСГ - 3 мМЕ/мл; ИПФР-I - 78,2 нг/мл; чХГ - 70 МЕ/мл, у обследуемой пациентки проведена математическая обработка полученных данных, используя формулу расчета ПП и ДП:

ПП=1,821+1×3-0,18×78,2+0,136×70=(0,20268).

Дифференциальный показатель ДП=ехр(0,20268)/(1+ехр(0,20268))=0,550496268.

Выявленный дифференциальный показатель более 0,5 свидетельствовал о существовании у данной больной «спорадической» формы синдрома «пустых» фолликулов, поэтому в дальнейшем ей рекомендовано провести повторные лечебные циклы ЭКО с целью получения собственных ооцитов.

В ходе данного исследования нами было обследовано 158 супружеских пар, обратившихся в Центр репродукции человека при Ростовском НИИ Акушерства и Педиатрии за период с 1996 г. по 2004 г., с целью проведения программ, включенных в перечень вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ). Возраст женщин из 158 супружеских пар, включенных в настоящее исследование, в обеих группах колебался от 21 до 46 лет. Средний возраст женщин 1 группы составил 32,12±4,59, 2 группы - 31,18±3,69. Все пациентки, включенные в обследование, были разделены на 2 клинические группы. Первую группу (контрольную) составили 82 женщины, проведенные по стандартной методике в программах ВРТ, с полноценной ответной реакцией яичников на стимуляцию суперовуляции. Во вторую (основную) группу были включены 76 больных с диагностированным синдромом «пустых» фолликулов в момент пункции фолликулов и аспирации их содержимого при проведении лечебных циклов программ ВРТ, с использованием стандартных протоколов ведения. Из 76 пациенток с синдромом «пустых» фолликулов у 46 женщин ни в одной из последующих попыток гонадотропной стимуляции аспирировать ооциты не удавалось («абсолютная» форма СПФ), в то время как у 30 обследуемых все же удалось получить ооциты в последующих программах ВРТ («спорадическая» форма СПФ).

Учитывая тот факт, что состав фолликулярной жидкости, в определенной мере, отражает гормональный состав крови (за счет гонадотропных гормонов, попадающих в яичник с током крови и стероидных гормонов, вырабатываемых в яичнике), ожидаемыми явились различия, выявленные нами в составе антральной среды у обследуемых контрольной и основной групп.

Результаты исследования гормонов в фолликулярной жидкости обследованных женщин основной группы свидетельствуют об отсутствии достоверных различий в уровне ЛГ, ФСГ, прогестерона, эстрадиола, тестостерона по сравнению с аналогичными показателями у пациенток группы сравнения (таблица 1).

Несмотря на отсутствие достоверных различий, более высокие концентрации ЛГ, прогестерона и эстрадиола, на фоне относительно сниженных показателей ФСГ и тестостерона, регистрируются у пациенток с полноценным фолликулярным аппаратом. При этом у обследуемых нами также проведен сравнительный анализ уровней интрафолликулярных регуляторов фолликуло- и оогенеза (эпидермальный фактор роста, инсулиноподобный фактор роста I, ингибин А). Результаты проведенного исследования свидетельствуют о неравноценности их распределения в «пустых» и полноценных фолликулах (таблица 2).

Результаты проведенных исследований, подчеркивают особую важность определения содержания таких биохимических субстратов антральной среды, как чХГ и ИПФР-I.

В таблице 3 приведены показатели интрафолликулярных регуляторов у пациенток с отрицательными результатами пункции фолликулов при всех последующих программах ВРТ (2-а подгруппа) и с результативными циклами (при пункции фолликулов в повторных лечебных циклах ЭКО удалось аспирировать ооциты) (2-б подгруппа).

Как видно из данных, представленных в таблице 3, концентрация лютеинизирующего гормона и эстрадиола в фолликулярной жидкости, аспирированной у пациенток с положительным результатом пункции, была достоверно выше, а тестостерона, напротив, достоверно ниже, чем у обследуемых в нерезультативных циклах. Эти различия, по-видимому, отражают суть патологического состояния, поскольку известно, что рост фолликулов и созревание в них ооцитов зависят от сложной цепи гормональной и факторной регуляции репродуктивной функции на различных этапах их поступательного преобразования. Антральная среда, в которой развивается фолликул, претерпевает циклическую трансформацию, зависимую от фазы менструального цикла и стадии развития фолликула.

В.К. Чайка, В.В. Луцик, И.К. Акимова, М.В. Попова
Донецкий региональный центр охраны материнства и детства

Вступление

Бесплодие - одна из самих актуальных проблем современной гинекологии. Несмотря на существенный прогресс в лечении бесплодия, не отмечается тенденция к снижению его частоты .

Проблема охраны репродуктивного здоровья населения Украины в настоящее время приобрела особую социальную значимость. Важным фактором, снижающим репродуктивный потенциал населения страны, является бесплодие в браке у 25% супружеских пар . У большинства женщин оно обусловлено непроходимостью маточных труб или их отсутствием. Все большее распространение при лечении бесплодия получает метод экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов в полость матки (ЭКО и ПЭ) . Эффективность ЭКО равна или превышает таковую в естественных условиях и составляет 35%.

Согласно приказу МОЗ Украины от 29.11.2004 г. № 579 "Про затвердження Порядку направлення жінок для проведення першого курсу лікування безплідності методами допоміжних репродуктивних технологій за абсолютними показаннями за бюджетні кошти", отделение диагностики и лечения бесплодного брака (ОДЛББ) Донецкого регионального центра охраны материнства и детства (ДРЦОМД) является базой для проведения одной попытки лечения бесплодия у женщин методами вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) по абсолютным показаниям за бюджетные средства.

Первый курс лечения бесплодия методами ВРТ проводится женщинам в возрасте 19-40 лет. Абсолютными показаниями для лечения являются: 1) нормогонадотропное бесплодие трубного происхождения: отсутствие или полная непроходимость обеих маточных труб; 2) суррогатное материнство при условии вынашивания беременности кровной родней: сестрой или матерью больной, у которой бесплодие маточного происхождения, связанное с отсутствием матки, аномалиями развития матки, синехиями в полости матки.

Все пациентки с бесплодием были обследованы по месту жительства согласно предписанию МЗО Украины от 11.10.2005 г. № 4.40-1004. Обследование женщин включало в себя: 1) группа, резус крови; 2) общий анализ крови; 3) общий анализ мочи; 4) коагулограмма; 5) биохимия крови; 6) анализ выделений из влагалища; 7) цитологическое исследование из шейки матки; 8) анализ на TORCH-инфекции; 9) RW; 10) ВИЧ; 11) антитела к вирусу гепатита В; 12) антиген к вирусу гепатита С; 13) гормональное обследование: ЛГ, ФСГ, эстрадиол на 2-3 день менструального цикла, тестостерон, пролактин, кортизол; 14) генетическое обследование; 15) осмотр специалистов (эндокринолог, психиатр, терапевт, инфекционист). Обследование мужчин: 1) генетическое обследование; 2) спермограмма; 3) RW; 4) ВИЧ.

Несмотря на большой перечень обследований и тщательный отбор, предусмотренные приказом № 579, пациенты нередко прибывают для лечения неподготовленными и недообследованными. В частности, с полипами шейки матки и полипами эндометрия, кистами яичника, гидро- и сактосальпинксами, повышенным уровнем тестостерона, кортизола. Эти пациенты требуют проведения подготовительного лечения, включающего гормональную терапию, иногда оперативного лечения.

За 2006 год нами проведено 345 циклов стимуляции суперовуляции с последующей пункцией фолликулов и переноса эмбрионов. Возрастной состав женщин выглядит следующим образом: 19-25 лет - 78 (22,6%); 26-30 лет - 114 (33,0%); 31-35 лет - 124 (36,0%); 36-40 лет - 29 (8,4%). Средний возраст пациенток составил 31,3 года, длительность бесплодия - в среднем 7,6 года.

Лечение получили женщины различных регионов Украины представленные в таблице 1.

Всем пациенткам проводили стимуляцию суперовуляции на фоне применения агонистов гонадотропин-релизинг гормона (ГнРГ) по длинному протоколу. Для десенситизации (18-22 день менструального цикла) применялся препарат диферелин 3,75 мг. Стимуляция суперовуляции проводилась препаратом Пурегон 50 МЕ, активным веществом которого является фолитропин-бета (рекомбинантный фолликулостимулирующий гормон, ФСГ). Число ампул, рекомендуемое МОЗ Украины на цикл стимуляции - 40.

На сегодняшний день, основным и единственным показанием для включения пациентов в программу ЭКО с ПЭ за бюджетные средства, является отсутствие или непроходимость маточных труб. Если речь идет только о трубном бесплодии, то такой набор медикаментов может быть и обоснован. Однако, эндокринный фактор бесплодия, в большей или меньшей степени, присутствует практически у каждой больной.

Кроме этого, целому ряду пациенток в возрасте после 30 лет, с оперированными яичниками, "плохим ответчикам", не подходит длинный протокол стимуляции. Им предпочтительней использовать короткий протокол, для которого необходимы агонисты релизинг-гормонов короткого действия, а их нет.

Нами проводился ультразвуковой и гормональный мониторинг зреющих фолликулов. При достижении доминантными фолликулами размеров 18-20 мм вводилась овуляторная доза хорионического гонадотропина (ХГ). В данном случае внутримышечно вводился препарат Прегнил 10 ТЕ. С помощью трансвагинальной пункции аспирировали фолликулы. Культивирование ооцитов проводили по стандартной методике в среде Menezo В2.

Основные показатели стимуляции суперовуляции у женщин с абсолютными показаниями представлены в таблице 2.

Перенос эмбрионов проводили на 2-3 сутки после пункции. В полость матки пациентки переносили не более 3 нормальных эмбрионов. Поддержку лютеиновой фазы проводили по стандартной схеме с использованием прогестерона, утрожестана или дуфастона.

При неадекватной стимуляции суперовуляции и вследствие различной чувствительности рецепторного аппарата яичников к вводимым препаратам, а следовательно, и различной реакции яичников, увеличивается риск развития серьезного осложнения - синдрома гиперстимуляции яичников (СГЯ) .

В литературе встречаются различные данные о частоте СГЯ, что обусловлено применением различных схем стимуляции суперовуляции и различных методов диагностики и профилактики этого осложнения . В среднем, по данным литературы, частота СГЯ колеблется в пределах от 8 до 23%. СГЯ средней степени составляет 1-7%, тяжелой - 1-1,8% на стимулированный цикл .

У 51 (14,8%) пролеченных нами женщин развился СГЯ. Из них: у 30 (8,7%) СГЯ легкой степени и у 21 (6,1%) СГЯ средней степени.

У женщин с легкой формой СГЯ уровень эстрадиола в среднем составлял 2050 pg/mL. При ультразвуковом исследовании диагностированы увеличенные до 6,0 см в диаметре яичники.

При средней степени СГЯ уровень эстрадиола в среднем составлял 4250 pg/m; яичники были увеличены до 6-10 см в диаметре; увеличение и напряжение живота, явные признаки асцита при ультразвуковом исследовании.
Лечение легкой степени СГЯ проводилось амбулаторно с применением малых объемов гипотонических жидкостей, таких как вода, сок и других легких напитков, а также трансфузии 6% рефортана 500,0 мл 1-2 раза.

Лечение СГЯ средней степени проводилось стационарно в гинекологическом отделении № 1 и отделении интенсивной терапии и реанимации ДРЦОМД. С целью восполнения ОЦК, возврата жидкости обратно в сосудистое русло, пациенткам вводились кристаллоидные растворы (физиологический раствор, раствор Рингера); коллоидные растворы (альбумин, гидроксиэтил крахмал); антигистаминные препараты; антикоагулянты. Одной пациентке был проведен сеанс плазмафереза. Пациенткам со средней степенью СГЯ была выполнена пункция брюшной полости, постановка катетера с целью выведения жидкости. После проведенного лечения мы наблюдали значительное клиническое улучшение, улучшение кровообращения и перфузии почек.

Первичную биохимическую диагностику беременности осуществляли на 14-й день после переноса эмбрионов путем определения концентрации ХГ в сыворотке крови. Последующую диагностику беременности (клиническую) проводили с помощью ультразвукового исследования на 21-й день после переноса эмбрионов. Ультразвуковое исследование сердцебиения плода, как правило, осуществляли при сроке беременности 4-5 недель.

Таким образом, эффективность лечения у 345 пациенток с трубной и трубно-перитонеальной формами бесплодия методом ЭКО и ПЭ составила 36,5% (126 женщин). В 2006 году уже родилось 20 (15,9%) детей.

Выводы
В ДРЦОМД согласно приказу № 579 МОЗ Украины проведено 345 циклов ЭКО и ПЭ. По возрасту пациентки распределились следующим образом: 19-25 лет - 78 (22,6%); 26-30 лет - 114 (33,0%); 31-35 лет - 124 (36,0%); 36-40 лет - 29 (8,4%). Средний возраст пациенток составил 31,3 года, длительность бесплодия - в среднем 7,6 года. По регионам данный вид лечения получили: АР Крым - 28 человек (8,1%); Днепропетровская область - 20 (5,7%); Донецкая область - 160 (46,3%); Запорожская область - 41 (11,8%); Луганская область - 18 (5,2%); Николаевская область - 13 (3,8%); Одесская область - 7 (2,0%); Полтавская область - 17 (4,8%); Сумская область - 7 (2,0%); Харьковская область - 12 (3,5%); Херсонская область - 13 (3,8%); Черкасская область - 4 (1,6%); г. Севастополь - 5 (1,4%). У 51 (14,8%) пролеченных нами женщин развился СГЯ. Из них: у 30 (8,7%) СГЯ легкой степени и у 21 (6,1%) СГЯ средней степени. Эффективность лечения бесплодия методом ЭКО и ПЭ составила 36,5% (126 женщин). В 2006 году уже родилось 20 (15,9%) детей.

При недостаточном для проведения ИИСМ ко­личестве сперматозоидов или при
отсутствии эф­фекта от ВМИ в течение нескольких циклов может быть проведено ЭКО, когда
сперматозоиды опло­дотворяют ооцит вне организма — in vitro , или «в
пробирке».

Вначале метод ЭКО и ПЭ применялся преиму­щественно при бесплодии,
обусловленном непрохо­димостью маточных труб или их отсутствием. В та­ких случаях метод
предусматривает получение яйце­клеток из яичника женщины, оплодотворение их in vitro и перенос
эмбриона в полость матки после не­скольких его дроблений в пробирке. Метод разрабо­тан Р. Эдвардсом и
П. Стептоу (Англия, 1978) и на­зван ими in vitro fertilization and miotransfer (IVF&ET).

Процедура ЭКО состоит из следующих этапов:

• отбор и обследование пациентов;
• индукция суперовуляции, включая мониторинг фолликулогенеза и развития эндометрия;
• пункция фолликулов яичников;
• инсеминация ооцитов и культивирование эмб­рионов in vitro ;
• перенос эмбрионов в полость матки;
• поддержка лютеиновой фазы стимулирован­ного менструального цикла; S диагностика беременности на
  ранних сроках.

Последние 15 лет внимание специалистов, рабо­тающих в программе ЭКО и ПЭ, привлечено к
схе­мам стимуляции суперовуляции с использованием агонистов гонадотропего-рилизинг-гормона (а-ГнРГ),
которые представляют собой группу синтетических соединений, сходных с естественным ГнРГ.

В соответствии с двухфазностью действия а-ГнРГ в программе ЭКО и ПЭ используют две
принципи­альные схемы стимуляции суперовуляции.

При так называемой «короткой» схеме введение а-ГнРГ и ЧМГ (ФСГ) начинают в ранней
фоллику-линовой фазе одновременно или ЧМГ (ФСГ) на­значают через 2—3 дня после первого введения а-ГнРГ
— в фазу активации аденогипофиза. Блокада функциональной активности аденогипофиза возни­кает уже
после начала стимуляции суперовуляции. Так, декапептил в ежедневной дозе 0,1 мг вводят подкожно со
второго дня менструального цикла до назначения овуляторной дозы ХГ. Стимуляцию су­перовуляции ЧМГ
начинают с пятого дня менстру­ального цикла с 2—3 ампул ЧМГ (75 ME— 225 ME) и проводят с соблюдением
критериев УЗИ и гормо­нального мониторинга до дня введения ХГ.

При использовании длинной схемы, считающей­ся «золотым стандартом», введение
а-ГнРГ начина­ют в ранней фолликулиновой или в середине лютеи­новой фазы цикла, предшествующего
стимуляции суперовуляции. Могут применяться а-ГнРГ как для ежедневного введения, так и депонированные
фор­мы. Большинство клиницистов предпочитают еже­дневные подкожные инъекции а-ГнРГ, так как они
более экономичны, имеют высокую клиническую эффективность и хорошо переносятся.

Сейчас чаще всего для достижения блокады функциональной активности аденогипофиза
ис­пользуют декапептил или диферелин для ежедневно­го подкожного введения в дозе 0,1 мг и
депо-дека-пептил для внутримышечного введения в дозе 3,75 мг, а в качестве стимулятора суперовуляции
— препара­ты ЧМГ и рекомбинантный ФСГ.

Через 10—17 дней от первого введения а-ГнРГ в результате снижения рецепторов ГнРГ в
клетках аденогипофиза (десенситизация) уровень гонадо-тропинов в плазме крови снижается до базального
(соответственно происходит блокада гонад) и пре­кращается спонтанное развитие фолликулов в
яич­никах.

Стимуляцию препаратами ЧМГ (ФСГ) начина­ют только после достижения блокады
секретор­ной активности аденогипофиза и вторично — яич­ников.

Критерии начала стимуляции суперовуляции в «длинных» схемах с использованием
а-ГнРГ и ЧМГ (ФСГ):

• снижение концентрации Е 2 в плазме крови до 30—50% от исходного уровня (менее 100 пмол/л или 30
  пг/мл);
• толщина эндометрия не более 5 мм.

Стимуляцию суперовуляции в схемах с исполь­зованием а-ГнРГ следует
проводить с обязательным использованием УЗИ и гормонального мониторинга независимо от формы введения
препарата и фазы менструального цикла, в которой оно начато.

Ежедневную дозу ЧМГ (ФСГ) в первые пять дней стимуляции определяют с учетом количества
фолликулов, полученных при предшествующих по­пытках ЭКО и ПЭ, и, как правило, она не превы­шает 2-3
ампул ЧМГ (ФСГ) (150 ME- 225 ME) в день до дня введения овуляторной дозы ХГ.

Определение времени введения овуляторной дозы ХГ — также один из ключевых моментов
про­ведения программы ЭКО и ПЭ. Овуляторная доза ХГ назначается после достижения уровня Е 2 в
плаз­ме крови не менее 1000 пмол/л (300 пг/мл) из рас­чета на каждый лидирующий фолликул, при разме­рах
лидирующих фолликулов 18—20 мм и толщине эндометрия не менее 9 мм. При наличии в одном или обоих яичниках
1—5 фолликулов овуляторная доза ХГ составляет обычно 5 тыс. MEХГ, если име­ется более 10 фолликулов
— 10 тыс. MEХГ. В каждом случае овуляторная доза ХГ определяется индивидуально.

При рассмотрении схем стимуляции суперовуля­ции нельзя и не упомянуть об антагонистах
ГнРГ. Использование антагонистов ГнРГ в схемах стиму­ляции суперовуляции в программе ЭКО и ПЭ имеет ряд
преимуществ перед применением а-ГнРГ: бло­када гонадотропной активности аденогипофиза воз­никает в
течение нескольких часов, без предшеству­ющей фазы активации; возможно не только предотвращение, но и
прекращение уже начавшегося «па­разитарного» пика ЛГ в период стимуляции; требу­ется
меньшее количество препаратов ЧМГ, ФСГ и их комбинаций; реже возникает СГЯ; почти вдвое сокращается
продолжительность лечения.

Антагонисты назначают по 0,25 мг или по 3,0 мг подкожно на 6—7-й день стимуляции
суперовуля­ции или при диаметре лидирующего фолликула 14 мм в течение 4—5 дней.

Назначение овуляторной дозы ХГ осуществляет­ся по описанным выше критериям, доза
подбирает­ся индивидуально. Через 35—36 часов производится трансвагинальная пункция фолликулов в
целях аспирации фолликулярной жидкости и получения преовуляторных ооцитов.

Метод культивирования преовуляторных ооци­тов состоит из нескольких этапов.

1. Забор ооцитов. Полученную фолликулярную жидкость эмбриолог анализирует на
   предмет поиска ооцитов на стереомикроскопе. Найденные ооциты последовательно промывают в среде для
   промывки ооцитов и помещают в С0 2 -инкубатор в среде для культивирования.
2. Подготовка сперматозоидов. Из полученной спермы выделяют фракцию наиболее
   подвиж­ных сперматозоидов путем центрифугирования в градиенте плотности либо методом свободного
   всплытия.

Оплодотворение. В случае ЭКО: ооциты пере­носят в среду
оплодотворения, содержащую пред­варительно выделенные наиболее подвижные спер­матозоиды, и
помещают в С0 2 -инкубатор. В случае ИКСИ: ооциты очищаются от кумулисных клеток и инъектируются
сперматозоидами.

1. Оценка оплодотворения. Культивирование. Че­рез 16—18 часов с момента
   оплодотворения ооциты оценивают на предмет выявления признаков нор­мального оплодотворения. Аномально
   оплодотво­ренные ооциты уничтожают, нормально оплодо­творенные — переносят в среду
   культивирования и помещают в С0 2 -инкубатор, где инкубируют до переноса в полость матки. Среды
   культивирования меняют согласно протоколу культивирования, при­нятому лабораторией.
2. Перенос эмбрионов. Перенос эмбрионов осу­ществляется на третьи либо пятые
   сутки культиви­рования (считая оценку оплодотворения — первыми сутками культивирования). Для
   переноса эмбрионы в среде для переноса помещают в катетер, который передают гинекологу.

Эмбрионы, полученные после оплодотворения ооцитов одной и той же пациентки, как правило,
отличаются по скорости дробления и морфологиче­ским параметрам. Качество дробления эмбрионов
оценивается по количеству и размеру бластомеров, по наличию и количеству фрагментации.

Качество эмбрионов, достигших стадии развития бластоцисты, оценивается по количеству и
размеру клеток трофектодермы, по наличию и качеству вну­триклеточной массы, по объему полости и толщине
зоны пелюцида.

Количество переносимых эмбрионов, как прави­ло, составляет не более двух, поскольку при
увеличении числа эмбрионов увеличивается риск моногоплодной беременности, что влечет за собой серьезные
проблемы акушерского и социального характера.

Возможные осложнения после ЭКО те же, что и после ВМИ, плюс возможность наружного и
внут­реннего кровотечения.

Программа ЭКО — эффективный метод восста­новления фертильности у пар с
мужским фактором бесплодия при получении от 500 тыс. до 1 млн быстроподвижных сперматозоидов и более 5% их
мор­фологически нормальных форм после обработки спермы в градиенте плотности. При этом показатель
оплодотворения ооцитов — в среднем 70—80%, бе­ременностей на стимулированный цикл — около 30%,
родов — около 20% (табл. 26).

Доказаны следующие противопоказания к ис­пользованию метода ЭКО и ПЭ:

Абсолютные:

• - злокачественные новообразования любой ло­кализации, в том числе в анамнезе.

Относительные:

• - соматические и психические заболевания, яв­ляющиеся противопоказаниями для вынаши­вания
  беременности и родов; опухоли яич­ников;
• - доброкачественные опухоли матки, требую­щие оперативного лечения;
• - острые воспалительные заболевания любой локализации.